Оценка метаболической активности лейкоцитов птиц в постнатальном онтогенезе и при вирусных антигенных воздействиях (часть 1)

Е.Г. Турицына, кандидат ветеринарных наук, доцент, Красноярский ГАУ, г. Красноярск Основной функцией лейкоцитов, в том числе и у птиц, является защита организма от генетически чужеродных тел, появляющихся в крови и тканях. Функции гранулоцитов, особенно нейтрофильных, связаны с наличием большого количества ферментов и основных белков, содержащихся в азурофильных и специфических гранулах. Кроме того, гранулоциты отличаются высоким уровнем энергетического обмена, в основе которого лежит утилизация гликогена, который используется ими как энергетический субстрат. Изменения метаболической активности лейкоцитов могут быть связаны с возрастом, физиологическим состоянием и воздействиями различных факторов на организм птиц, в том числе инфекционных. Известно об ингибирующем влиянии многих вирусных инфекций на хемотаксис и бактерицидные способности гранулоцитов. Имеется возможность не только прямого влияния вирусов на клетки, но и последующее вторичное действие их продуктов на нейтрофилы. Некоторые вирусные инфекции сопровождаются транзиторной гранулоцитопенией, что убедительно показано в экспериментах на животных. Недостаточность метаболической активности различных форм лейкоцитов может рассматриваться как фактор риска для развития патологических состоянии, сопровождающихся формированием вторичного иммунодефицита, поскольку именно на уровне клеток происходит формирование ответной реакции на воздействия различных факторов эндогенного и экзогенного происхождения. Цель и методика исследований. В связи с тем, что в условиях промышленных птицефабрик птица раннего постнатального возраста подвергается интенсивным воздействиям живых вакцинных вирусов, была поставлена цель - провести оценку метаболической активности лейкоцитов периферической крови цыплят первых 2-х месяцев жизни при иммунизациях. В задачи исследованиий входило изучение кислородзависимой биоцидности лейкоцитов по содержанию миелопероксидазы, кислороднезависимой бактерицидности по уровню лизосомально-катионных белков и энергетических возможностей лейкоцитов по количеству гликогена. Материалом для исследований являлись мазки крови цыплят первых месяцев жизни породы «Хайсекс коричневый), приготовленные в разные сроки после плановых иммунизаций живыми вирусвакцинами, проводимых в условиях промышленного птицеводческого предприятия в соответствии с утвержденной схемой вакцинопрофилактики. Контролем служили мазки крови неиммунизированной птицы того же возраста. Морфологический состав крови изучали на мазках, окрашенных комбинированным методом по Паппенгейму, миелопероксидазу исследовали по методу Грэхем-Кнолля с о-толидином или бензидином, гликоген изучали в ШИК-реакции с реактивом Шиффа по МакМанусу. Лизосомально-катионные белки определяли 0,1-процентным забуференным спирто¬вым раствором прочного зеленого марки C.1.42053 (производство «Диаэм») по В.Е. Пигаревскому. Для определения миелопероксидазы и гликогена использовали стандартные наборы («Диахим-ЦитоСтеИн», Санкт-Петербург). Контролем при определении гликогена служили мазки крови, обработанные слюной, которые инкубировали при температуре 37 °С в течение 30 минут. При последующем окрашивании они давали отрицательную реакцию, так как гликоген расщеплялся амилазой слюны. Полуколичественную оценку интенсивности цитохимических реакций проводили, используя принцип Астальди-Верга, основанный на выявлении различной степени интенсивности специфической окраски. В зависимости от нее исследуемые элементы делили на четыре группы: с отрицательной реакцией (-), слабоположительной (+), положительной (++) и резко положительной (+++). Определяли средний цитохимический коэффициент (СЦК) по L. Kaplow (1955) в модификации В.Е. Пигаревского, Ю.А. Мазинга. С этой целью дифференцировали 100 исследуемых клеток по указанной выше системе. Полученный процент клеток в каждой группе умножали на соответствующее данной группе число плюсов. Сумма этих величин, деленная на 100, представляла собой СЦК для одной клетки. В тех случаях, когда изучаемые вещества локализовались в клетках в виде единичных гранул (например, гликоген в лимфоцитах), результат цитохимической реакции выражали в процентах клеток, дающих положительную реакцию. При проведении исследований были соблюдены стандартные условия обработки препаратов и единые критерии визуальной оценки для выведения количественных показателей учета, что в целом могло отражаться на результатах исследования. Исследование мазков крови и микрофотографирование проведено на микроскопе МС 100 (Micros, Austria) фотокамерой САМ V200, совмещенной с компьютером при увеличениях объектива х40 и х100. Полученные данные обработаны методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента.