Гистоструктура слепых кишок бройлеров в норме и при экспериментальном эшерихиозе
Гистоструктура слепых кишок бройлеров в норме и при экспериментальном эшерихиозе
Шестаков В.А., кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник отдела ветеринарии, ФГБНУ СибНИИП
В специальной литературе патологические изменения в органах птицы при инфекционных болезнях часто ограничиваются описанием внешних признаков, без информации о реакции тканей. При этом гистоструктурная характеристика упускается из-за недостатка сведений об их изменениях. Некоторые авторы, характеризуя состояние органов, не называют развивающуюся патологию. Имеет место несоответствие морфологической номенклатуре, например: «...эпителиальный слой слизистой оболочки толстого и слепого отдела кишечника...», непонятные сведения «...в просвете ворсинок...». При этом внимание уделяется только тимусу, бурсе Фабрициуса и селезёнке без учёта возраста птицы и факта провизорности — физиологической (возрастной) атрофии данных органов. Из-за недостаточной изученности нормальной гистологической структуры кишечника бройлеров упускается характеристика лимфоидной ткани и фолликулов, имеющихся в слизистой оболочке кишечника птицы.
По данным ФГУ ЦНМВЛ, в Российской Федерации среди бактериальных болезней 60% приходится на кол и бактериоз. Многие из этих заболеваний имеют сходное клиническое проявление и протекают в ассоциации, что затрудняет постановку клинического и патолого-анатомического диагноза.
К настоящему времени свойства некоторых возбудителей изменились, а в этиологии болезней возросла роль условно-патогенной микрофлоры, что усложняет диагностику бактериологическим методом. Применение антибиотиков делает невозможным и/или искажает результаты бактериологического исследования. При постановке диагноза бактериологическим методом работа ведётся с живыми патогенными штаммами возбудителей, поэтому материал должен доставляться в лабораторию не позднее четырёх часов после гибели птицы, но это условие трудноосуществимо даже в пределах одного региона. Для гистологической диагностики важен не возбудитель, а структурные изменения в тканях («следы»), оставленные им.
Целью нашего исследования является изучение гистологической структуры стенки слепых кишок цыплят-бройлеров в норме и определение в них патологических изменений при эшерихиозе для возможности диагностики гистологическим методом.
Материалы и методы. Исследования проведены в отделе ветеринарии ФГБНУ СибНИИП в рамках научных опытов с экспериментальным заражением птицы. Для эксперимента использованы:
- 14-дневные цыплята кросса «Сибиряк 2С» — 70 голов, из которых 60 в возрасте 21-го дня были заражены патогенной культурой E.coli. Диагностический убой проведён в 35-дневном возрасте;
- 21-дневные цыплята кросса «Иза Хаббард» — 150 цыплят (заражались все), убой также в 35 дней.
В этих двух опытах заражение проводили внутрибрюшинно патогенной культурой E.coli, взвесью односуточных агаровых культур в дозе 0,5×109 микробных тел по ОСМ ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Использовали полевые штаммы кишечной палочки, выделенные в ЭПХ СибНИИП, патогенность которых (биопроба) проверена на белых мышах и 21-дневных цыплятах в соответствии с Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных (утв. Минсельхозом России 27.07.2000). Цыплятам контрольной интактной группы внутрибрюшинно вводили 0,5 мл физиологического раствора;
- 13-дневные цыплята кросса «Сибиряк 2С» — 80 цыплят, из которых 70 в возрасте 14 дней были заражены per os смесью энтеропатогенных и условно-патогенных культур Е. coli (02, 020, 078), P. mirabilis, С. amalonaticus, С. diversus в равном соотношении в дозе 1 мл бактериальной взвеси с содержанием 1 млрд. микробных тел в 1 мл раствора по оптическому стандарту мутности (СОП №1-98). Диагностический убой проведен в 21-дневном возрасте.
Группы комплектовали методом аналогов, всего в трёх опытах использовано 300 цыплят-бройлеров, из которых 210 были экспериментально заражены в 21 день, а 70 — в 14-дневном возрасте.
При наблюдении за птицей, погибшей после заражения, производили патологоанатомическое вскрытие, взятие патматериала для гистологического исследования. После завершения опытов убой проводили декапитацией с последующим патологоанатомическим осмотром и взятием кусочков слепых кишок (от трёх птиц из каждой группы). Материал фиксировали в 5%-ном растворе формальдегида на фосфатном буфере и по общепринятой методике обезвоживали в спиртах возрастающей крепости с последующей заливкой в парафин. Гистологические срезы толщиной 7 мкм окрашивали гематоксилином Ганзена и эозином.
Результаты исследований. При анализе гистологических препаратов слепой кишки интактных цыплят, не подвергавшихся заражению, установлено наличие индивидуальных отличий по степени морфофункциональной дифференциации слизистой оболочки, мышечная и серозная оболочки структурных отличий не имели. Наружная серозная оболочка всегда оставалась тонкой, но по периметру кишки имела неодинаковое строение. Под мезотелием находилась узкая полоска, построенная из рыхлых коротких и разных по толщине волокон соединительной ткани. Такая же рыхлая ткань находилась не только между слоями и пучками гладких миоцитов мышечной оболочки, но и в подслизистой основе слизистой оболочки. При строго поперечном сечении кишки ядра гладких миоцитов наружного слоя имели овальную и даже круглую форму, что свидетельствует об их косо продольном направлении. Артерии, вены, лимфатические сосуды и ганглии межмышечного (Мейснерова) нервного сплетения локализовались в наружном слое. Циркулярный слой в нескольких местах пересекался кровеносными сосудами. В нём пучки гладких миоцитов также имели разное направление, на что указывает различная форма их ядер — от веретеновидной до короткой овальной. Точно такая же форма ядер гладких миоцитов была и в мышечной пластинке.
Подслизистая основа слизистой оболочки хорошо заметна только возле кровеносных сосудов и ганглиев Ауэрбаховского нервного сплетения.
Собственная пластинка слизистой оболочки цыплят-бройлеров данного возраста имела полиморфные складки, различавшиеся по размерам, форме, плотности стромы и наличию или отсутствию фолликулов. У всех особей соединительнотканная основа складок была плотно инфильтрирована лимфоидными клетками. Тяжи, состоящие из соединительной ткани и гладких миоцитов, обнаруживались только в тонких складках, а в толстых они неразличимы из-за большого количества клеток инфильтрата.
Редким исключением являлись те основания толстых складок, где находились обособленные лимфатические фолликулы, у которых лимфоидная ткань тонкой соединительнотканной полоской отделена от других тканей.
Лимфатические фолликулы имелись только в толстых складках, лимфоциты в них располагались плотно, но центр фолликула всегда оставался более рыхлым. Если фолликулы локализовались близко к мышечной оболочке, то в этих местах собственная пластинка слизистой оболочки не содержала крипт и была прижата к мышечной оболочке настолько близко, что подслизистая основа не просматривалась.
Кровеносные капилляры в собственной пластинке слизистой оболочки выделялись не резко из-за малого диаметра — их просветы заняты одним-двумя эритроцитами.
Вся поверхность складок и находящихся на них ворсинок была покрыта однослойным многорядным столбчатым эпителием. В криптах и на складках слизистой оболочки около трети из общего количества клеток составляли мукоциты, выделяющиеся пузыревидной формой цитоплазмы. Цитоплазма столбчатых эпителиоцитов однородна, на её фоне хорошо заметны овально-удлинённые ядра, занимающие базальную половину клетки. Высота эпителия увеличивалась в направлении к верхушкам складок, но на толстых складках она была наименьшей. Плотная щёточная каёмка хорошо заметна и прерывалась только над мукоцитами. Базальная мембрана эпителия из-за малой толщины едва заметна.
У цыплят опытной группы, выживших после заражения, патологических изменений в стенках слепых кишок не обнаружено, состояние серозной, мышечной и слизистой оболочек было таким же, как и у цыплят контрольной группы, не подвергавшихся заражению. Но в отличие от контрольной группы во всех лимфатических фолликулах плотность распределения лимфоцитов по периферии больше, чем в центре, имелись реактивные центры. Вторым отличием являлось наличие в строме складок и в фолликулах большого количества эозинофильных лейкоцитов.
У цыплят, погибших после заражения, патологические изменения в слизистой оболочке характерны для десквамативного катара. Эпителий сохранялся только в криптах, остальная поверхность слизистой оболочки была лишена эпителия и на ней находилась только обнажённая и утолщённая базальная мембрана. Складки и ворсинки на складках утолщены. Строма собственной пластинки слизистой оболочки разрыхлена отёчной жидкостью, диффузно и неравномерно инфильтрирована лимфоидными клетками и эозинофильными лейкоцитами. Наиболее плотные инфильтраты находились у поверхности складок, лишённой эпителия. Волокна соединительной ткани и пучки гладких миоцитов трудно различимы. Все кровеносные капилляры были переполнены кровью, и чем ближе к поверхности складки, тем сильнее их наполнение. Ядра эндотелиоцитов выступали в просвет сосудов. Капилляры в верхней трети и у поверхности складок растянуты настолько, что в поперечнике их просветов помещалось до восьми эритроцитов.
В лимфатических фолликулах реактивные центры не выделялись, плотность расположения лимфоцитов корковой зоны была неравномерной. Возле переполненных интерфолликулярных кровеносных капилляров ткань более рыхлая. В основаниях складок возле мышечной пластинки встречались диапедезные кровоизлияния.
Таким образом, при экспериментальном эшерихиозе цыплят-бройлеров в мышечной и серозной оболочках слепых кишок изменения гистоструктуры не обнаруживаются. Патологический процесс локализуется в собственной пластинке слизистой оболочки, в которой развивается катаральное воспаление. Альтерация проявляется в виде десквамации эпителия ворсинок и складок, а сосудистая реакция усиливается к поверхности слизистой оболочки гиперемией капилляров, кровоизлияниями в основании складок, отёком стромы с инфильтрацией лимфоидными клетками и эозинофильными лейкоцитами.
У цыплят опытной группы, погибших после заражения, десквамативный катар приводит к полному обнажению поверхности слизистой оболочки. Пролиферация эпителия и лимфоидной ткани не активируется, на что указывает рыхлое расположение лейкоцитов по всему объёму фолликулов и отсутствие реактивных центров.
Отсутствие пролиферации свидетельствует о недостаточной (гипоэргической) реакции организма на этиологический фактор. Отсутствие патологических изменений в стенках слепых кишок у цыплят той же группы, но выживших после заражения, подтверждает, что пролиферация эпителия обеспечила его регенерацию на всей поверхности слизистой оболочки. Указанный факт в сочетании с пролиферацией лимфоидной ткани фолликулов слизистой оболочки характерен для нормэргической защитно-приспособительной реакции организма. Инфильтрация эозинофильными лейкоцитами, сохранившаяся у цыплят этой группы, объясняется тем, что инфильтраты, в отличие от отёков, рассасываются долго, они являются следами минувшей воспалительной реакции.
Наличие реакции лимфатических фолликулов стенки слепых кишок на E.coli у цыплят, выживших после экспериментального заражения, указывает на то, что уже в этом возрасте (21-35 дней) фолликулы выполняют иммунную функцию, следовательно, их роль в патогенезе и диагностике болезней птицы бактериальной этиологии должна учитываться.
Источник: журнал «Птицеводство» №3, 2015 г.
В специальной литературе патологические изменения в органах птицы при инфекционных болезнях часто ограничиваются описанием внешних признаков, без информации о реакции тканей. При этом гистоструктурная характеристика упускается из-за недостатка сведений об их изменениях. Некоторые авторы, характеризуя состояние органов, не называют развивающуюся патологию. Имеет место несоответствие морфологической номенклатуре, например: «...эпителиальный слой слизистой оболочки толстого и слепого отдела кишечника...», непонятные сведения «...в просвете ворсинок...». При этом внимание уделяется только тимусу, бурсе Фабрициуса и селезёнке без учёта возраста птицы и факта провизорности — физиологической (возрастной) атрофии данных органов. Из-за недостаточной изученности нормальной гистологической структуры кишечника бройлеров упускается характеристика лимфоидной ткани и фолликулов, имеющихся в слизистой оболочке кишечника птицы.
По данным ФГУ ЦНМВЛ, в Российской Федерации среди бактериальных болезней 60% приходится на кол и бактериоз. Многие из этих заболеваний имеют сходное клиническое проявление и протекают в ассоциации, что затрудняет постановку клинического и патолого-анатомического диагноза.
К настоящему времени свойства некоторых возбудителей изменились, а в этиологии болезней возросла роль условно-патогенной микрофлоры, что усложняет диагностику бактериологическим методом. Применение антибиотиков делает невозможным и/или искажает результаты бактериологического исследования. При постановке диагноза бактериологическим методом работа ведётся с живыми патогенными штаммами возбудителей, поэтому материал должен доставляться в лабораторию не позднее четырёх часов после гибели птицы, но это условие трудноосуществимо даже в пределах одного региона. Для гистологической диагностики важен не возбудитель, а структурные изменения в тканях («следы»), оставленные им.
Целью нашего исследования является изучение гистологической структуры стенки слепых кишок цыплят-бройлеров в норме и определение в них патологических изменений при эшерихиозе для возможности диагностики гистологическим методом.
Материалы и методы. Исследования проведены в отделе ветеринарии ФГБНУ СибНИИП в рамках научных опытов с экспериментальным заражением птицы. Для эксперимента использованы:
- 14-дневные цыплята кросса «Сибиряк 2С» — 70 голов, из которых 60 в возрасте 21-го дня были заражены патогенной культурой E.coli. Диагностический убой проведён в 35-дневном возрасте;
- 21-дневные цыплята кросса «Иза Хаббард» — 150 цыплят (заражались все), убой также в 35 дней.
В этих двух опытах заражение проводили внутрибрюшинно патогенной культурой E.coli, взвесью односуточных агаровых культур в дозе 0,5×109 микробных тел по ОСМ ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Использовали полевые штаммы кишечной палочки, выделенные в ЭПХ СибНИИП, патогенность которых (биопроба) проверена на белых мышах и 21-дневных цыплятах в соответствии с Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных (утв. Минсельхозом России 27.07.2000). Цыплятам контрольной интактной группы внутрибрюшинно вводили 0,5 мл физиологического раствора;
- 13-дневные цыплята кросса «Сибиряк 2С» — 80 цыплят, из которых 70 в возрасте 14 дней были заражены per os смесью энтеропатогенных и условно-патогенных культур Е. coli (02, 020, 078), P. mirabilis, С. amalonaticus, С. diversus в равном соотношении в дозе 1 мл бактериальной взвеси с содержанием 1 млрд. микробных тел в 1 мл раствора по оптическому стандарту мутности (СОП №1-98). Диагностический убой проведен в 21-дневном возрасте.
Группы комплектовали методом аналогов, всего в трёх опытах использовано 300 цыплят-бройлеров, из которых 210 были экспериментально заражены в 21 день, а 70 — в 14-дневном возрасте.
При наблюдении за птицей, погибшей после заражения, производили патологоанатомическое вскрытие, взятие патматериала для гистологического исследования. После завершения опытов убой проводили декапитацией с последующим патологоанатомическим осмотром и взятием кусочков слепых кишок (от трёх птиц из каждой группы). Материал фиксировали в 5%-ном растворе формальдегида на фосфатном буфере и по общепринятой методике обезвоживали в спиртах возрастающей крепости с последующей заливкой в парафин. Гистологические срезы толщиной 7 мкм окрашивали гематоксилином Ганзена и эозином.
Результаты исследований. При анализе гистологических препаратов слепой кишки интактных цыплят, не подвергавшихся заражению, установлено наличие индивидуальных отличий по степени морфофункциональной дифференциации слизистой оболочки, мышечная и серозная оболочки структурных отличий не имели. Наружная серозная оболочка всегда оставалась тонкой, но по периметру кишки имела неодинаковое строение. Под мезотелием находилась узкая полоска, построенная из рыхлых коротких и разных по толщине волокон соединительной ткани. Такая же рыхлая ткань находилась не только между слоями и пучками гладких миоцитов мышечной оболочки, но и в подслизистой основе слизистой оболочки. При строго поперечном сечении кишки ядра гладких миоцитов наружного слоя имели овальную и даже круглую форму, что свидетельствует об их косо продольном направлении. Артерии, вены, лимфатические сосуды и ганглии межмышечного (Мейснерова) нервного сплетения локализовались в наружном слое. Циркулярный слой в нескольких местах пересекался кровеносными сосудами. В нём пучки гладких миоцитов также имели разное направление, на что указывает различная форма их ядер — от веретеновидной до короткой овальной. Точно такая же форма ядер гладких миоцитов была и в мышечной пластинке.
Подслизистая основа слизистой оболочки хорошо заметна только возле кровеносных сосудов и ганглиев Ауэрбаховского нервного сплетения.
Собственная пластинка слизистой оболочки цыплят-бройлеров данного возраста имела полиморфные складки, различавшиеся по размерам, форме, плотности стромы и наличию или отсутствию фолликулов. У всех особей соединительнотканная основа складок была плотно инфильтрирована лимфоидными клетками. Тяжи, состоящие из соединительной ткани и гладких миоцитов, обнаруживались только в тонких складках, а в толстых они неразличимы из-за большого количества клеток инфильтрата.
Редким исключением являлись те основания толстых складок, где находились обособленные лимфатические фолликулы, у которых лимфоидная ткань тонкой соединительнотканной полоской отделена от других тканей.
Лимфатические фолликулы имелись только в толстых складках, лимфоциты в них располагались плотно, но центр фолликула всегда оставался более рыхлым. Если фолликулы локализовались близко к мышечной оболочке, то в этих местах собственная пластинка слизистой оболочки не содержала крипт и была прижата к мышечной оболочке настолько близко, что подслизистая основа не просматривалась.
Кровеносные капилляры в собственной пластинке слизистой оболочки выделялись не резко из-за малого диаметра — их просветы заняты одним-двумя эритроцитами.
Вся поверхность складок и находящихся на них ворсинок была покрыта однослойным многорядным столбчатым эпителием. В криптах и на складках слизистой оболочки около трети из общего количества клеток составляли мукоциты, выделяющиеся пузыревидной формой цитоплазмы. Цитоплазма столбчатых эпителиоцитов однородна, на её фоне хорошо заметны овально-удлинённые ядра, занимающие базальную половину клетки. Высота эпителия увеличивалась в направлении к верхушкам складок, но на толстых складках она была наименьшей. Плотная щёточная каёмка хорошо заметна и прерывалась только над мукоцитами. Базальная мембрана эпителия из-за малой толщины едва заметна.
У цыплят опытной группы, выживших после заражения, патологических изменений в стенках слепых кишок не обнаружено, состояние серозной, мышечной и слизистой оболочек было таким же, как и у цыплят контрольной группы, не подвергавшихся заражению. Но в отличие от контрольной группы во всех лимфатических фолликулах плотность распределения лимфоцитов по периферии больше, чем в центре, имелись реактивные центры. Вторым отличием являлось наличие в строме складок и в фолликулах большого количества эозинофильных лейкоцитов.
У цыплят, погибших после заражения, патологические изменения в слизистой оболочке характерны для десквамативного катара. Эпителий сохранялся только в криптах, остальная поверхность слизистой оболочки была лишена эпителия и на ней находилась только обнажённая и утолщённая базальная мембрана. Складки и ворсинки на складках утолщены. Строма собственной пластинки слизистой оболочки разрыхлена отёчной жидкостью, диффузно и неравномерно инфильтрирована лимфоидными клетками и эозинофильными лейкоцитами. Наиболее плотные инфильтраты находились у поверхности складок, лишённой эпителия. Волокна соединительной ткани и пучки гладких миоцитов трудно различимы. Все кровеносные капилляры были переполнены кровью, и чем ближе к поверхности складки, тем сильнее их наполнение. Ядра эндотелиоцитов выступали в просвет сосудов. Капилляры в верхней трети и у поверхности складок растянуты настолько, что в поперечнике их просветов помещалось до восьми эритроцитов.
В лимфатических фолликулах реактивные центры не выделялись, плотность расположения лимфоцитов корковой зоны была неравномерной. Возле переполненных интерфолликулярных кровеносных капилляров ткань более рыхлая. В основаниях складок возле мышечной пластинки встречались диапедезные кровоизлияния.
Таким образом, при экспериментальном эшерихиозе цыплят-бройлеров в мышечной и серозной оболочках слепых кишок изменения гистоструктуры не обнаруживаются. Патологический процесс локализуется в собственной пластинке слизистой оболочки, в которой развивается катаральное воспаление. Альтерация проявляется в виде десквамации эпителия ворсинок и складок, а сосудистая реакция усиливается к поверхности слизистой оболочки гиперемией капилляров, кровоизлияниями в основании складок, отёком стромы с инфильтрацией лимфоидными клетками и эозинофильными лейкоцитами.
У цыплят опытной группы, погибших после заражения, десквамативный катар приводит к полному обнажению поверхности слизистой оболочки. Пролиферация эпителия и лимфоидной ткани не активируется, на что указывает рыхлое расположение лейкоцитов по всему объёму фолликулов и отсутствие реактивных центров.
Отсутствие пролиферации свидетельствует о недостаточной (гипоэргической) реакции организма на этиологический фактор. Отсутствие патологических изменений в стенках слепых кишок у цыплят той же группы, но выживших после заражения, подтверждает, что пролиферация эпителия обеспечила его регенерацию на всей поверхности слизистой оболочки. Указанный факт в сочетании с пролиферацией лимфоидной ткани фолликулов слизистой оболочки характерен для нормэргической защитно-приспособительной реакции организма. Инфильтрация эозинофильными лейкоцитами, сохранившаяся у цыплят этой группы, объясняется тем, что инфильтраты, в отличие от отёков, рассасываются долго, они являются следами минувшей воспалительной реакции.
Наличие реакции лимфатических фолликулов стенки слепых кишок на E.coli у цыплят, выживших после экспериментального заражения, указывает на то, что уже в этом возрасте (21-35 дней) фолликулы выполняют иммунную функцию, следовательно, их роль в патогенезе и диагностике болезней птицы бактериальной этиологии должна учитываться.
Источник: журнал «Птицеводство» №3, 2015 г.
Источник: http://webpticeprom.ru
